HB101 Chemically Competent Cell

基因型：

F- mcrB mrr hsdS20(rB- mB-) recA13 leuB6 ara-14 proA2lacY1 galK2 xyl-5 mtl-1 rpsL20 (strR) glnV44λ-

簡要說明：

HB101菌株是 E. Coli K12菌株和 E. Coli B 菌株的雜合產物（同時也是Stbl3的原始菌株）。recA13突變可有效抑制長片段末端重復區(qū)的重組，降低錯誤重組的概率；但不含核酸酶endA1突變，體內核酸酶含量較高，提取質粒時務必使用質粒提取試劑盒中去蛋白液。hsdS20背景使HB101缺失內切酶系統(tǒng)，增強了外源DNA的穩(wěn)定性和提取質量；此菌株具有LIAN霉素抗性；不存在lacIqZΔM15，不可用于藍、白斑篩選。  High5TM系列HB101感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質粒檢測轉化效率>5×108cfu/μg。

操作說明：

1.HB101感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時，加入目的DNA（質粒或連接產物并用手打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。 

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB無菌培養(yǎng)基，混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。 

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。 

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項：

1.感受態(tài)細胞處于冰水混合狀態(tài)時立即插入冰上。 

2.混入質粒或連接產物時應輕柔操作。 

3.轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。 

4.操作過程中勿將感受態(tài)暴露于氧化性環(huán)境中，例如超凈臺應將臭氧排凈后再使用。